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Acid phosphatase (AppA)

2019-11-14 19:29タンパク質合成実績

ジスルフィド結合シャペロン

目次[非表示]

1.タンパク質の特徴
2.合成反応

2.1.基本条件
2.2.検討内容

2.2.1.添加量
2.2.2.条件の組み合わせ

3.合成結果

3.1.合成産物の確認
3.2.活性の評価

タンパク質の特徴

Organism	Escherichia coli
Synthesized region	23 Glun - 432 Leu (+FLAG)
UniProt ID	P07102
Length	421 a.a.
Molecular weight	45,959 Da
No. of disulfide bonds	4

合成反応

基本条件

鋳型の種類	PCR産物 (1 ng/µL reaction)
使用したキット	PUREfrex 2.1 (#PF213-0.25) PDI Set (#PF006-0.5) DsbC Set (#PF005-0.5) DnaK Mix (#PF003-0.5)
合成条件	0.5 mM Cysteine 4 mM GSH
合成温度と時間	37℃、4 hrs

検討内容

添加量

hPDI

GSSG

hEro1α

DsbC

DnaK Mix

2 µM

2 mM

0.2 µM

4 µM

5 µM DnaK

1 µM DnaJ

1 µM GrpE

条件の組み合わせ

	GSSG	hEro1α	DnaK Mix
hPDI	+ / -	+ / -	+ / -
DsbC	+ / -	-	+ / -
Isomeraseなし	+ / -	-	+ / -

合成結果

シャペロンの添加効果が高く、GSSGやIsomeraseを含まなくても活性が得られました。

合成産物の確認

合成したタンパク質の還元型は "red" 、酸化型は "oxi" で示しています。

活性の評価

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